La autofluorescencia derivada de células se encuentra principalmente en el rango de luz verde. Utilice tintes fluorescentes desplazados al rojo para limitar y evitar la fluorescencia de fondo inespecífica.
La modulación del plano focal del lector de microplacas en función del lugar donde la intensidad de la señal de la muestra es máxima garantizará una detección óptima. Para células adherentes cultivadas en microplacas, ajuste el foco de detección del lector de placas al fondo del pocillo.
Los componentes del medio de cultivo celular, como el suero o el rojo fenol, son una fuente de autofluorescencia. Utilice tampones o un medio de baja autofluorescencia para reducir esta señal de fondo inespecífica.
Los lectores de placas suelen medir en el centro del pocillo, lo que puede resultar problemático cuando se trabaja con células adherentes distribuidas de forma heterogénea. Realice escaneos de pozos que distribuyan las mediciones por toda la superficie del pozo, reduciendo la variabilidad de los datos.
Al medir las células adherentes desde arriba del pozo, la luz de excitación y emisión debe pasar a través del sobrenadante potencialmente autofluorescente. Seleccione la óptica inferior para evitar efectos de autofluorescencia derivados de los medios o el tampón.