Cre-loxP La recombinación permite a los científicos escindir, insertar o invertir segmentos de ADN específicos con una precisión sin precedentes.1,2 Esto funciona a través de dos componentes clave: una recombinasa Cre y loxP Sitios de reconocimiento de secuencias. La enzima Cre identifica pares de loxP sitios (puntas de flecha), que flanquean (flox) el ADN, y cataliza la recombinación recíproca del ADN entre los dos sitios para escindir un pequeño trozo de ADN.
Para generar un ratón knockout para tejido específico, los investigadores crían un ratón con una cre transgén bajo un promotor inducible o específico de tipo de tejido o célula (A) con un ratón homocigótico floxado (B).
La descendencia es heterocigota para el gen diana floxed (C) y se reproduce con el ratón homocigoto floxed (B).
El ratón experimental resultante es hemicigoto para cre y homocigoto para loxP (D). Este es el genotipo necesario para desactivar condicionalmente el gen diana en el tejido específico.
Referencias
- Saur B. Expresión funcional del sistema de recombinación específico de sitio cre-lox en la levadura Saccharomyces cerevisiae. Mol Cell Bio. 1987;7(6):2087-2096.
- Saur B, Henderson N. Recombinación de ADN específica de sitio en células de mamíferos mediante la recombinasa Cre del bacteriófago P1. Proc Natl Acad Sci EE.UU.. 1988;85(14):5166-5170.
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