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Los investigadores obtienen datos de qPCR consistentes y precisos de instrumentos con uniformidad térmica mejorada y sistemas de detección óptica actualizados.
Los científicos de todo el mundo emplean la PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) para medir la cantidad de secuencias de ácidos nucleicos específicas en una muestra. Si bien esta técnica es rápida, sensible y económica, el instrumento que emplean afecta directamente la confiabilidad y precisión de sus datos.
En los sistemas de qPCR, los bloques de reacción cambian rápidamente entre calentamiento y enfriamiento para obtener las temperaturas precisas requeridas para la desnaturalización de nucleótidos, la hibridación de cebadores y la extensión mediada por polimerasa. Sin embargo, la velocidad a la que el bloque cambia de temperatura afecta no solo la duración del experimento, sino también la Uniformidad térmica del bloque.1 Además, muchos bloques de reacción pierden calor más rápido en sus bordes, lo que genera variaciones de temperatura entre los pocillos de muestra y errores en los datos.
Aunque las fuentes de luz estacionarias se utilizan comúnmente en los instrumentos de qPCR, generan diferentes longitudes de trayectoria de luz a través de los pocillos del bloque y, en consecuencia, producen discrepancias en los datos. Los científicos pueden corregir las diferencias en la trayectoria de luz entre los pocillos normalizando la señal fluorescente específica del objetivo con la señal de un colorante pasivo, como el colorante fluorescente ROX. Sin embargo, esto reduce la cantidad de secuencias que pueden detectar simultáneamente mediante multiplexación.
Los investigadores necesitan instrumentos qPCR mejorados que superen estos desafíos, como el Sistema de PCR en tiempo real CFX OpusMediante un sistema de lanzadera óptica para centrar los diodos emisores de luz sobre cada pocillo, el instrumento elimina la variación de la longitud del recorrido de la luz y permite a los científicos detectar hasta cinco objetivos por pocillo de reacción. Esta característica, junto con el rendimiento térmico uniforme de su innovador bloque de reacción, permite a los investigadores obtener mediciones precisas y reproducibles de todos los pocillos, al tiempo que maximiza las capacidades de multiplexación del sistema.
Lea más sobre esta tecnología de vanguardia. Instrumento de PCR cuantitativa.
¿Cuál es el principal problema al que se enfrenta al realizar experimentos de qPCR?