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Hay muchas técnicas que permiten a los científicos silenciar un gen, pero si el efecto es transitorio o permanente depende del tipo de enfoque.
Los investigadores pueden interrogar experimentalmente la función de uno o más genes utilizando herramientas de knockout o knockdown. Aunque ambos enfoques interfieren en última instancia con la función de los genes, las técnicas de knockout y knockdown logran esto a través de mecanismos distintos que operan en diferentes niveles.
Derribo genético: un truco a corto plazo
La supresión de genes reduce la expresión de un gen a nivel de ARN. Los científicos suelen emplear métodos de interferencia de ARN (ARNi) y de interferencia de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas (CRISPRi) para lograr ese objetivo. Mientras que la ARNi explota la Vía de ARNip utilizado por las células para identificar y dirigir un ARN mensajero específico para su degradación, CrispRi Se une al ADN y bloquea el inicio o la elongación de la transcripción dependiendo de la región a la que se une.1,2 Como ambas técnicas actúan a nivel de transcripción, no se producen cambios en la secuencia de ADN del gen, lo que da lugar a un efecto fenotípico transitorio. Los investigadores optan por este silenciamiento génico temporal cuando estudian genes que son esenciales para el desarrollo de un organismo y cuya eliminación podría ser letal.
Gene Knockout: Alteración del modelo genético
La eliminación de genes se acerca por completo Eliminar la expresión genética a nivel del ADN.3 Los investigadores pueden lograr esto utilizando herramientas de edición del genoma, como nucleasas de dedos de zinc (ZFN), nucleasas efectoras de tipo activador de la transcripción (TALEN), y Crispr y sus endonucleasas asociadas.4-6 Estas herramientas producen roturas de doble cadena en sitios específicos del ADN, que la célula intenta reparar mediante un mecanismo de reparación propenso a errores que puede alterar la secuencia del gen objetivo. Como las herramientas de knockout dan como resultado un silenciamiento sostenido del gen, eliminan los efectos de confusión que podrían permanecer después de la eliminación del gen.