GENERACIÓN DE BIBLIOTECA DE VISUALIZACIÓN DE FAGOS
DISEÑADO POR ERIN LEMIEUX
Los científicos insertan secuencias de ADN variables que codifican sus proteínas de interés en plásmidos que portan un gen de la proteína de la cubierta del fago, un gen de resistencia a los antibióticos y una señal de empaquetamiento. Luego transforman los plásmidos en un vector bacteriano y lo infectan con un fago auxiliar que suministra las otras proteínas virales necesarias. Esto genera la biblioteca de fagos, donde cada virión expresa versiones de la proteína de interés en su proteína de cubierta y lleva su secuencia genética en su genoma.
PURIFICACIÓN POR AFINIDAD
DISEÑADO POR ERIN LEMIEUX
En el siguiente paso, los investigadores aíslan los fagos que expresan proteínas de superficie mediante un ensayo de unión de ligando de superficie. Los fagos eluidos finales pueden portar una mezcla de diferentes epítopos de proteínas de superficie.
AMPLIFICACIÓN DE FAGOS
DISEÑADO POR ERIN LEMIEUX
En el paso de amplificación, los investigadores propagan los fagos eluidos en un cultivo bacteriano y pueden realizar rondas adicionales de purificación por afinidad.
AISLAMIENTO DE CLON
DISEÑADO POR ERIN LEMIEUX
Los investigadores infectan bacterias con los fagos seleccionados y las cultivan en placas que contienen antibióticos. En el paso final, seleccionan colonias resistentes para aislar los plásmidos, que luego se secuencian y clonan en los vectores de producción de proteínas deseados para diversas aplicaciones.
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