A La técnica rápida de amplificación isotérmica permite la identificación de patógenos y la detección de resistencia a los antibióticos en entornos de bajos recursos.
La amplificación por recombinasa polimerasa (RPA) es una técnica para copiar rápidamente segmentos de ADN. A diferencia de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), no requiere ciclos térmicos, por lo que se necesita menos equipo.
CÓMO FUNCIONA RPALos investigadores necesitan tres elementos que definan la RPA: proteínas recombinasas uvsX, proteínas de unión monocatenarias y ADN polimerasas que desplazan cadenas. También necesitan cebadores y nucleótidos para amplificar el ADN objetivo. |
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Primero, los cebadores se unen a las proteínas recombinasa uvsX para formar complejos recombinasa-cebador. |
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Luego, la recombinasa inserta los cebadores en sitios complementarios del ADN. |
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Las proteínas de unión monocatenarias se unen a la cadena de ADN desplazada y la estabilizan. |
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La recombinasa se desensambla y la ADN polimerasa que desplaza las cadenas se une al extremo 3′ del cebador. |
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La polimerasa alarga el cebador. |
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Las cadenas de ADN objetivo se duplican.1 |
APLICACIONES DE RPA
Debido a que RPA es rápida, portátil y funciona a bajas temperaturas, incluso calor corporal puede ser suficiente2—tiene aplicaciones para pruebas en el punto de atención para genética3 y enfermedades infecciosas,4 pruebas de calidad del agua,5 detección de resistencia a los antibióticos,6 y monitoreo de patógenos agrícolas7.
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Pruebas en el lugar de atención para enfermedades genéticas e infecciosas |
Pruebas de calidad del agua |
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Detección de resistencia a los antibióticos. |
Monitoreo de patógenos agrícolas |
Referencias
- Lobato IM, O’Sullivan CK. Amplificación de recombinasa polimerasa: conceptos básicos, aplicaciones y avances recientes. Analista de Tendencias Química. 2018;98:19-35.
- Crannell ZA et al. Incubación sin equipos de reacciones de amplificación de la polimerasa recombinasa utilizando calor corporal. MÁS UNO. 2014;9(11):e112146.
- Natoli ME et al. Amplificación de la polimerasa recombinasa específica de alelos para detectar la anemia de células falciformes en entornos de bajos recursos. química anal. 2021;93(11):4832-4840.
- Seely S et al. Prueba molecular en el lugar de atención para la detección de 14 genotipos de virus del papiloma humano de alto riesgo en un solo tubo. química anal. 2023;95(36):13488-13496.
- Kunze A et al. Amplificación isotérmica de ácidos nucleicos en chip en una plataforma de análisis de microarrays de quimioluminiscencia basada en flujo para la detección de virus y bacterias. química anal. 2016;88(1):898-905.
- Nelson MM et al. Detección molecular rápida de resistencia a macrólidos. Enfermedades infecciosas de BMC. 2019;19(1):144.
- Silva G et al. Detección rápida y específica del virus del mosaico del ñame mediante amplificación de la polimerasa recombinasa de transcripción inversa. Métodos J Virol. 2015;222:138-144.
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